( 三 ) 精子的采集與分離
小動物(如小鼠、大鼠等) 一般采取處死動物,然后從附睪中采集精子。
較大動物(如兔、豬等)則用采精的方法獲得精子。
具體操作見本章第一節(jié)。
精液中含有大量精漿,其中不乏精子獲能的抑制因子,在體外受精前必須將其去掉。精子分離的方法主要有:懸浮法、玻璃棉過濾法、密度梯度離心法和離心洗滌法。常用的是離心洗滌法。
( 四 ) 精子的體外獲能
精子成熟后,雖然具有一定的活力,但卻沒有受精的能力。精子在通過雌性生殖道過程中,經(jīng)歷了一系列生理、生化的變化,獲得了受精能力,這個過程稱為精子獲能(sperm capacitation )。采集到的精子,未經(jīng)過雌性生殖道的一系列生理、生化變化,因此需要體外獲能處理。
目前精子的獲能處理方法主要有以下幾種。
1. 與血清白蛋白的溶液長時間孵育
血清白蛋白是血清中的大分子物質(zhì),具有很強(qiáng)的結(jié)合膽固醇和鋅離子的能力,可除去精子質(zhì)膜中的分部膽固醇和鋅離子,降低膽固醇在精子質(zhì)膜中的比例,進(jìn)而改變精子質(zhì)膜的穩(wěn)定性,導(dǎo)致精子的獲能。該法由于需要的時間較長,且誘發(fā)精子獲能的作用不強(qiáng),故僅在體外受精技術(shù)研究的初期進(jìn)行過嘗試,具有一定作用,目前僅作為精子獲能的一種輔助手段。
2. 與含有卵泡液的培養(yǎng)液進(jìn)行孵育
卵泡液含有來自血清的大分子物質(zhì),且含有誘發(fā)精子獲能和頂體反應(yīng)的因子,故在培養(yǎng)液中添加一定濃度的卵泡液能誘發(fā)精子的獲能。