凍存： 凍存的細胞應該是處于良好的狀態(tài)。

按傳代方法把細胞懸浮。

將懸浮的細胞進行1000轉(zhuǎn)的低數(shù)離心，使細胞沉淀。

用含10%DMSO的完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞，并把細胞混合液分裝到凍存管中，管口最好用封口膠封住。

細胞逐步降溫有兩種方法：A.傳統(tǒng)的先把盛放細胞混合液的凍存管放入4℃10分鐘，然后放負20℃，之后是負80℃過夜，最后移入液氮罐保存。B. 把盛放細胞混合液的凍存管放入程序性降溫盒，然后在盒子里灌滿異丙醇，之后放入負80℃過夜，最后移入液氮罐保存。

復蘇：

把從液氮罐里取出的凍存管迅速放入37℃的溫水中，并不斷搖晃凍存管，使其內(nèi)部的細胞混合液融化。

將凍存管中的混合液移入15ml離心管中，打開凍存管之前要用酒精擦拭凍存管管口。在離心管內(nèi)迅速加入10ml完全培養(yǎng)液，并輕輕吹打使細胞混勻。

1000轉(zhuǎn)離心5分鐘，棄上清，再加入10ml完全培養(yǎng)液，吹打混勻。

1000轉(zhuǎn)離心5分鐘，棄上清。加入6ml完全培養(yǎng)液，吹打混勻后移入培養(yǎng)瓶內(nèi)正常培養(yǎng)。

第二天要給細胞換液。