傳代： 一般貼壁細(xì)胞長滿培養(yǎng)瓶培養(yǎng)面積的90%左右就應(yīng)該對細(xì)胞進(jìn)行傳代。貼壁細(xì)胞長滿培養(yǎng)面，就會產(chǎn)生接觸抑制，影響細(xì)胞的狀態(tài)。

對著酒精燈火焰打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用移液管小心吸去培養(yǎng)液，注意移液管不要碰到細(xì)胞層，吸液時可將細(xì)胞瓶稍微傾斜。

吸取2-3ml PBS漂洗細(xì)胞，去掉殘余血清并平衡鹽離子。具體操作為：將PBS從背對著細(xì)胞層的一側(cè)加入，傾斜培養(yǎng)瓶，讓PBS溶液覆蓋整個細(xì)胞表面，之后再把PBS溶液吸去。移液管注意不能碰到細(xì)胞層。

吸取1-1.5ml 25%胰酶加入培養(yǎng)瓶，將細(xì)胞從培養(yǎng)平面上消化下來。具體操作為：將胰酶從背對著細(xì)胞層的一側(cè)加入，傾斜培養(yǎng)瓶，讓胰酶溶液覆蓋整個細(xì)胞表面，默數(shù)5s之后迅速把胰酶溶液吸去，殘留大約0.2ml胰酶在培養(yǎng)瓶中。移液管注意不能碰到細(xì)胞層。將培養(yǎng)瓶蓋上，左右傾斜培養(yǎng)瓶，讓殘余的一點(diǎn)點(diǎn)胰酶溶液再和細(xì)胞層反應(yīng)。1min后輕輕拍打培養(yǎng)瓶側(cè)面。如果肉眼能看見細(xì)胞層慢慢從培養(yǎng)平面脫落，則消化成功。否則，再加一點(diǎn)點(diǎn)新胰酶，重復(fù)操作。

吸去2ml左右完全DMEM培養(yǎng)液加入培養(yǎng)瓶，用移液管吸取培養(yǎng)液和殘余胰酶混合物對著培養(yǎng)瓶底壁進(jìn)行吹打，使以消化的細(xì)胞全部脫離瓶壁并分散開來。

根據(jù)培養(yǎng)的需要確定傳代細(xì)胞的數(shù)量，將細(xì)胞懸浮液吸取到新的培養(yǎng)瓶中，再加入適量完全DMEM培養(yǎng)液，并再次吹打細(xì)胞。（培養(yǎng)液最終以蓋住整個細(xì)胞培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)面，深度3-4mm，并且不會沾染到培養(yǎng)瓶瓶口為準(zhǔn)）

最后給新培養(yǎng)瓶做好標(biāo)記，在超凈臺內(nèi)將蓋緊的培養(yǎng)瓶瓶蓋旋松半圈，然后放入培養(yǎng)箱。培養(yǎng)瓶瓶蓋旋松是為了讓培養(yǎng)箱內(nèi)氣體能進(jìn)入培養(yǎng)瓶。

培養(yǎng)： 不同細(xì)胞的培養(yǎng)條件略有不同，293細(xì)胞的培養(yǎng)條件是37℃，5%二氧化碳。細(xì)胞培養(yǎng)液中一般含有碳酸氫鈉，通過跟二氧化碳的作用來維持培養(yǎng)液的Ph值。培養(yǎng)液中一般用酚紅作為Ph指示劑，如果二氧化碳不通暢，培養(yǎng)液偏堿性，則呈現(xiàn)暗紅色。二氧化碳通常，培養(yǎng)液偏酸性，呈現(xiàn)橙黃色。培養(yǎng)液偏堿性，會造成細(xì)胞無法生長或死亡。所以可以根據(jù)培養(yǎng)液顏色來判斷瓶蓋是否擰得過緊。細(xì)胞如果長時間不傳代，每隔3天應(yīng)該給細(xì)胞換次培養(yǎng)液。