2. 體細(xì)胞作為核供體
1997年,"多莉"的成功誕生(Wilmut et al,1997),表明成年哺乳動(dòng)物的體細(xì)胞不僅具有基因組的全能性,而且還能在卵母細(xì)胞質(zhì)中回復(fù)到發(fā)育的起始狀態(tài),完成整個(gè)個(gè)體發(fā)生過程。自此,成年動(dòng)物的多種體細(xì)胞 (包括皮膚成纖維細(xì)胞和顆粒細(xì)胞等)被廣泛用作克隆的核移植供體細(xì)胞,并在小鼠和豬等多種動(dòng)物上獲得成功。
用體細(xì)胞作為核供體進(jìn)行核移植時(shí),亦需對(duì)其細(xì)胞周期進(jìn)行調(diào)控。調(diào)控供體細(xì)胞周期最為常用的方法是血清饑餓法。AKagi等(2000)的試驗(yàn)表明,顆粒細(xì)胞經(jīng)血清饑餓培養(yǎng)后,則移植胚胎的囊胚發(fā)育率明顯高于新鮮顆粒細(xì)胞核移植胚胎的囊胚發(fā)育率。
調(diào)控細(xì)胞周期的另一種方法是用 Aphidicolin(APD)培養(yǎng)處理供體細(xì)胞。APD 是一種哺乳動(dòng)物 DNA 聚合酶的可逆性抑制劑,可將細(xì)胞周期阻抑在 G1 到 S 期的過渡階段。 Kues等(2000)先用血清饑餓法培養(yǎng)豬的成纖維細(xì)胞2d,再用含6µmol/L APD的 10%FBS培養(yǎng)被培養(yǎng)14h, 可使 80.2% 細(xì)胞停留在 G1/S 期。
目前已經(jīng)應(yīng)用于體細(xì)胞核移植的供體細(xì)胞有如下幾種。
(1) 胎兒成纖維細(xì)胞
(2) 乳腺細(xì)胞
Willmut等從一只6歲妊娠母羊乳腺中采取細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)傳代和血清饑餓法處理后，通過核移植得到一只活羔，誕生了世界首例成年體細(xì)胞核移植后代Dolly。
(3) 卵丘 / 顆粒細(xì)胞
Wakayama 等分離卵母細(xì)胞周圍的卵丘細(xì)胞作為核供體細(xì)胞,不經(jīng)培養(yǎng)直接作核移植,獲得 50 多只克隆小鼠。
(4) 輸卵管/子宮上皮細(xì)胞。
(5) 肌肉細(xì)胞。
(6) 耳部皮膚細(xì)胞。
不同種類的體細(xì)胞,其核移植效果存在著明顯差異。目前普遍認(rèn)為,顆粒細(xì)胞的核移植效果最好(katoetal,1998)。究其原因,可能是因?yàn)?①卵丘細(xì)胞是自然靜止在 CO/G1 期的細(xì)胞。②顆粒細(xì)胞上存在著與卵母細(xì)胞緊密聯(lián)系的胞質(zhì)微絨毛橋（cytoplasmic bridges of microvilli),它們將可能有助于供體核同受體胞質(zhì)問相關(guān)因子的交換。③卵丘細(xì)胞內(nèi)端粒酶的活性較高,會(huì)由于染色體端粒變短而使細(xì)胞老化。