( 一 ) 供體細(xì)胞的準(zhǔn)備
供體細(xì)胞的準(zhǔn)備是核移植技術(shù)最為關(guān)系的一環(huán) , 也是非常重要的影響因素之一。作為核供體的細(xì)胞可以是胚胎細(xì)胞 , 也可以是 ES 細(xì)胞或 ES 樣細(xì)胞、胎兒成纖維細(xì)胞、未分化的PGCs 或高度分化的成年動(dòng)物體細(xì)胞。
1. 胚胎細(xì)胞作為核供體
哺乳動(dòng)物胚胎細(xì)胞核移植實(shí)驗(yàn)證實(shí),從 2 細(xì)胞期到內(nèi)細(xì)胞團(tuán)的胚胎細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞都具有發(fā)育的全能性,都可以作為供體細(xì)胞。然而供體細(xì)胞的胚胎的胚齡和類型對(duì)核移植結(jié)果有時(shí)產(chǎn)生一定的影響。哺乳動(dòng)物的胚胎細(xì)胞核移植時(shí)一般選擇 16～32 細(xì)胞期的胚胎細(xì)胞作為例較為合適。Zakharchenko(1996)等的研究則發(fā)現(xiàn),晚期桑葚胚的核移植效果最好,且體內(nèi)胚胎優(yōu)于體外胚胎。
供體細(xì)胞和受體細(xì)胞所處的細(xì)胞周期階段對(duì)核移植胚胎的發(fā)育率也有重要影響。小鼠核移植試驗(yàn)的早期研究曾表明,融合晚期的供體和受體細(xì)胞可取得最好的胚胎發(fā)育率。Wilmut等(1997)用血清饑餓法將綿羊的乳腺上皮細(xì)胞靜止在G0期,成功獲得了成年體細(xì)胞的克隆羊,進(jìn)一步表明細(xì)胞周期調(diào)控對(duì)核移植效果的重要性。