( 五 ) 精子獲能檢測
    精子獲能后將發(fā)生一系列明顯的變化,主要表現(xiàn)為代謝活動顯著增強,氧攝入量增加2～4 倍,運動速度加快,頭部膨大,極易發(fā)生頂體反應(yīng)。為判斷精子獲能與否,通常采用以下幾種檢測方法。
1. 精子形態(tài)及運動方式的觀察
    獲能的精子可在倒置顯微鏡下觀察到其頭部膨大,活力增強,出現(xiàn)超活化的運動現(xiàn)象。與未獲能處理的精子做前后比較,即可初步判定精子是否獲能。
2. 頂體反應(yīng)的檢測
    如要進一步確切判定精子是否獲能,則可通過誘發(fā)其頂體反應(yīng),然后檢測其頂體的完整曾得出定論。具體做法是將經(jīng)獲能處理的精子與100µg/m1的溶血卵磷脂孵育15min,然后通過下列方法檢查頂體的完整情況 :
    雙重染色法 : 精子經(jīng)獲能處理后,加入等量1%多聚甲醛PBS 固定15min,而后離心0.5min(9000 -14000g)。去掉上清液后,加入1ml等滲的 NaCl溶液,再離心 0.5min 去掉上清液。取 25µl精液與 25 µl 2.9% 檸檬酸鈉溶液混勻,然后加入5Oml 染色液(1.7份95%,1.4 份1%Fast green FCF，0.7份 1%Eosin B)染色 1.5min。取 lOµl經(jīng)染色的精液涂片、干燥,然后加蓋蓋玻片,在放大400～500倍的明視野顯微鏡下觀察。如在頭部有厚的藍綠區(qū)，表明明頂體完整。如僅見粉紅色,表明頂體脫落,已發(fā)生頂體反應(yīng),說明精子已經(jīng)獲能。該法的優(yōu)點是無需昂貴的設(shè)備,簡單易行;缺點是易發(fā)生誤判。
    透射電鏡觀察:獲能的精子經(jīng)溶血卵磷脂誘發(fā)頂體反應(yīng)后,按照電鏡技術(shù)的固定、包埋和切片,然后進行頂體的完整性觀察。若發(fā)現(xiàn)精子頭部質(zhì)膜與頂體外膜泡狀化,或僅殘存頂體內(nèi)膜,便可判斷精子已發(fā)生頂體反應(yīng)。此法的成本高,制片繁瑣,可操作性不強。