細胞培養(yǎng)

首先，抗生素的發(fā)展使得我們可以輕易避免許多曾經(jīng)困擾細胞培養(yǎng)的污染問題。第二是技術(shù)的發(fā)展，如利用胰酶將細胞從培養(yǎng)瓶上消化下來，從而獲得持續(xù)生長的細胞株(如HeLa細胞)。第三，利用這些細胞株，科學家們能夠研制標準化、化學成分確定的細胞培養(yǎng)基進而更利于細胞的生長。這三個方面的聯(lián)合發(fā)展，使得越來越多的科學家在他們的研究中采用了細胞、組織和器官培養(yǎng)的方法。

在上個世紀60年代和70年代，這一技術(shù)的商業(yè)化應用更進一步影響細胞的培養(yǎng)且一直持續(xù)到今天。如康寧公司開始研發(fā)和銷售一次性塑料和玻璃細胞培養(yǎng)產(chǎn)品、改進的過濾產(chǎn)品和材料、液體和粉末狀組織培養(yǎng)基以及高通量藥物篩選的系列相關產(chǎn)品。這些和其他技術(shù)的持續(xù)發(fā)展使得細胞培養(yǎng)在大量實驗室和工業(yè)企業(yè)中的應用更為普遍。

在150mm培養(yǎng)皿表面對人包皮外植體進行固定染色。培養(yǎng)外植體大約兩個星期。9個外植體中2個無法生長。剩下的外植體生長良好。每個方框約寬2cm。

原代培養(yǎng)

當采用外科操作的方法將細胞從有機體中分離下來，然后置于合適的培養(yǎng)環(huán)境中，它們會附著、分裂和生長。這稱為原代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)有兩種基本的方法。第一種，使用外植塊，將小片的組織粘附到玻璃或經(jīng)處理的塑料培養(yǎng)瓶中，并浸于培養(yǎng)液中。幾天之后，單個細胞將從組織外植塊中移動到培養(yǎng)瓶的表面或基質(zhì)中開始分裂生長。第二種方法，也是使用更廣泛的方法，通過在組織碎片中加入消化（蛋白水解）酶，如胰酶或膠原酶，消化成團聚集的細胞從而加快這一步驟。最終得到單細胞的懸液，然后將其置于含有培養(yǎng)液的細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)，讓其繼續(xù)生長分裂。這種方法成為酶解。

對亮星花魚細胞進行原代培養(yǎng)。胚胎切碎后用胰酶進行解離。然后將細胞培養(yǎng)一周左右，形成融合的單層細胞。

傳代接種

當原代培養(yǎng)瓶中的細胞已經(jīng)生長且布滿了所有可用的培養(yǎng)基質(zhì)后，它們必須進行傳代以便為繼續(xù)生長提供空間。這通常需要將細胞盡可能輕柔地從基質(zhì)上用胰酶消化下來。這些酶類似于原代培養(yǎng)中使用的酶，它能夠打斷使細胞粘附到基質(zhì)上的蛋白鍵。有些細胞株可以通過輕輕刮除培養(yǎng)瓶底部的細胞加以收集。收集之后，將細胞懸液進行進一步的分散并置于新的培養(yǎng)瓶中。

當細胞過多時，則可以用合適的低溫保護的試劑，如二甲基亞砜或甘油進行小心冰凍，然后置于低溫環(huán)境（－130℃以下）中，直到需要再次使用。低溫保存細胞的理論和技術(shù)已經(jīng)包括在康寧技術(shù)通報：關于動物細胞培養(yǎng)低溫保存的初級指南（參考文獻9）。