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動物實驗技術:實驗動物臟器摘取技術

來源:動物實驗技術發(fā)布時間:2015-03-12 09:59:49

1. 甲狀腺摘取術
甲狀腺位于甲狀軟骨的緊下方、氣管腹側,其左右成對,色淡紅。左右甲狀腺通過峽部的連接橋連接。在甲狀腺的上部1/3處,有一個比甲狀腺色淺的粟粒大的甲狀旁腺緊緊貼在甲狀腺上。
(1)家兔甲狀腺摘除術
   取家兔仰臥位,綁緊于家兔固定臺上;手術部位使用脫毛劑脫毛;乙醚麻醉后,使用2%碘酒及75%酒精進行皮膚消毒,并鋪消毒巾;沿頸部正中線自甲狀軟骨下切開頸部皮膚及其下層的闊約肌并開始分層;鈍性分離頸筋膜及血管,用三齒或四齒的鈍鉤自將其從正中線拉向兩側,從而分離出位于氣管上方前面及側面的甲狀腺;結扎甲狀腺上下動脈及甲狀腺靜脈,摘除甲狀腺;將肌肉及皮膚分層縫合,縫合處消毒滅菌,敷消毒紗布,將實驗 動物置溫暖處觀察飼養(yǎng)。
(2)大鼠甲狀腺摘除術
   取大鼠仰臥位,綁緊于大鼠固定板上;手術部位使用剪毛剪剪毛;乙醚麻醉后,使用2%碘酒及75%酒精進行皮膚消毒,并鋪消毒巾;沿大鼠頸部皮膚正中線切開2cm切口,掛上開創(chuàng)器;用鑷子將皮膚下的領下淋巴結分開,重新掛上開創(chuàng)器,暴露肌層;縱向分開肌肉后,可見到氣管及附著在氣管上的一對甲狀腺;將甲狀腺峽部分開后,使用眼科鑷夾住其末端,從氣管上分離甲狀腺;剝離完最前端的附著物后,用眼科鑷夾住止血后即可摘除甲狀腺;將肌肉及皮膚分層縫合,縫合處消毒滅菌,敷消毒紗布,將實驗動物置溫暖處觀察飼養(yǎng)。
2. 垂體摘除術
垂體位于動物中腦正中線與耳道口連線的交叉點上。嚙齒類實驗動物因蝶鞍平整,垂體易被摘除而較常用。下面以大鼠的咽旁法摘除大鼠垂體手術步驟為例介紹如下。
將大鼠麻醉后腹面向上固定于板上;剪去大鼠頸部被毛,局部常規(guī)消毒;對動物作頸正中切口并鈍性分離皮下筋膜及領下腺,直到暴露出胸骨舌骨肌;從由側胸骨舌骨肌外側緣向下、自內分離肌肉層,直到顱底正中線,找到枕骨嵴;由枕骨嵴向兩側剝離附著于枕骨上的肌肉 , 并 向上延伸分離出枕蝶縫合;以枕骨嵴與枕蝶縫合的交點為中心鉆顱區(qū)。鉆顱時用彎尖眼科鑷子向頭端拉咽后壁,一方面暴露鉆顱區(qū),另一方面保護咽后壁不被損傷。調節(jié)鉆顱針針芯約長于針齒0.5mm, 并將針芯固定于枕骨嵴與枕蝶縫合的交點,垂直向下鉆動,到感覺骨板鉆通,阻力減弱時,立即拔出鉆顱針;用小棉球沾去鉆孔的滲血,用帶鉤的長直針挑出或配合用直尖眼科鑷子夾出外、內骨板,用三角針挑破垂體的腦膜,便可見粉紅的垂體。大鼠的腦垂體位于間腦腹面,與丘腦下部相連。由于大鼠垂體嵌在顱底骨蝶骨的垂體窩內,故摘丘腦時很容易將垂體剝離。大鼠垂體背面緊貼在腦橋前方的橫溝內。從矢狀切面觀察,大鼠腦垂體大致呈三角形;然后使用連接到1/8馬力吸引器的玻璃管吸出垂體。若發(fā)現(xiàn)有出血情況,可使用沾有腎上腺素的小棉球壓迫止血;手術完畢,縫合傷口。
3. 胸腺摘除術
實驗動物的胸腺摘除術常使用幼齡小鼠或新生小鼠,也可以使用成年小鼠。下面介紹成年小鼠和新生小鼠的胸腺摘除手術步驟。
(1)成年小鼠的胸腺摘除術
   麻醉小鼠后固定(小鼠頭部轉向手術者),常規(guī)進行皮膚消毒;沿頸中線縱切至上胸,去筋膜,分離胸骨甲狀肌和胸乳頭肌,暴露出腹側氣管;使用虹膜鉗單齒臂分開胸骨甲狀肌 , 使用牽引器將兩肌推向兩側并暴露氣管查看中隔;使用彎細分離鉗提起胸骨,見到小鼠胸腺上葉;使用彎角吸引器玻璃導管(內徑 6mm)伸至中隔2mm,導管連接吸引燒瓶和真空泵 98.6kPa 并將吸引器調至0.667kPa(適當情況下可用手指遮蓋抽氣口);吸管逐步深入中隔(可滴一滴甘油于中隔)將左葉吸取;同法吸取右葉;胸腺摘除完畢后除去牽引器將肌肉復位,并縫合肌層和皮層。
(2)新生小鼠的胸腺摘除術
   將新生小鼠置于冰箱中,5~lOmin 后可見到小鼠皮膚由紅色變?yōu)樯n白、呼吸停止(以鑷子夾四肢或尾巴無反應為宜);固定小鼠于固定板上使用常規(guī)法 院滅菌處理;在手術放大鏡視野下于胸骨正中線縱行切開皮膚長約 5mm,并使用眼科鑷分離皮下組織和胸骨后軟組織;然后使用眼科剪從頸部向下沿正中線縱行剪開胸骨到第二助間;暴露胸腺后分離并游離每葉胸腺;然后手術者經口負壓使用玻璃吸管(內徑 0.8~1.6mm,吸管另一端連接有橡膠管和輸液滴管)可將胸腺完整吸出;胸腺取出后,將切口縫合并消毒處理。
4. 腎上腺摘除術
實驗動物的腎上腺摘除分為單側腎上腺摘除和雙側腎上腺摘除兩類。                     
大鼠腎上腺與腎臟不相連,位于腎臟上方的腹后壁,呈淺黃色的豆形。下面以大鼠的腎上腺摘除手術為例介紹手術步驟。
將大鼠麻醉后固定于手術臺上,背部剪毛,常規(guī)消毒處理;在胸腰椎交界處,沿腹部正中線切開皮膚約3~4cm,并使大鼠向左側位;在左肋緣與脊柱交界處,縱向剪開薄層腰肌(切口約1~2cm),撐開切口即可暴露出深紅色的腎臟;用蚊式鉗將周圍脂肪分離,并在腎上腺下面將通至腎上腺的血管緊緊夾住,也可用縫線結扎;然后使用無鉤彎小鑷改制的環(huán)形鑷將腎上腺摘除,也可用小剪刀將腎上腺剪下;縫合肌層及皮層。
同法摘除左側腎上腺
5. 腎臟摘除術
實驗動物的腎臟切除術可分為全腎切除、腎大部切除、部分腎切除三種。下面介紹大鼠的全腎、部分腎切除手術。
(1)大鼠的全腎切除術
  腹腔注射麻醉實驗大鼠后,將大鼠俯臥位固定于固定板上;常規(guī)手術部位消毒、鋪巾。以肋脊角為標志作左或右背部斜切口,逐層切開分離進入腹腔,找到腎臟,并使用止血鉗分離腎臟周圍脂肪囊和腎蒂(應特別小心分離開腎上腺)。充分暴露腎臟后,用手將腎臟牽引出切口外,然后左手夾持腎臟向外牽拉,右手使用止血鉗在腎門下將腎蒂夾住,確認腎臟動脈、腎靜脈和輸尿管在內后,用線在鉗夾處作雙道線結扎和縫合結扎。使用剪刀剪斷結扎線上部腎蒂,清理腹腔后提起未剪斷的腎蒂結扎線頭,并將結扎的腎蒂放入腹腔。確認腹腔無出血后剪斷結扎線頭,縫合腹腔、腹壁。
(2)大鼠的腎臟大部切除術
   同上法分離出腎臟后,用刀片或剪刀直接剪去上下極。
操作步驟為:切除左側腎臟→明膠海綿壓迫斷面止血→檢查出血點→清理腹腔→縫合;也可以結扎腎動脈靜脈及輸尿管,切斷結扎部取腎。具體操作步驟為:游離左側腎臟→切開腎臟被膜→暴露腎實質→使用直針穿線,穿透腎實質→打扣→拉緊腎臟,直到腎臟勒斷→復位制→清理腹腔→縫合。
6. 肝切除術
實驗動物的肝葉切除可根據(jù)實驗目的選用一葉或幾葉切除。肝臟切除手術的關鍵是正確分離和結扎肝葉動脈、靜脈血管。下面以大鼠的肝臟切除術為例簡要介紹手術步驟。
將大鼠麻醉(戊巴比妥鈉 4Omg/kg)后仰臥固定于手術臺上;將劍突以下的腹部被毛沾上肥皂水用剃毛刀剃干凈,并使用脫毛劑脫毛;常規(guī)消毒、鋪巾;在劍突下腹部正中線使用手術刀切開皮膚(一般 200g 左右的大鼠,切口長度維持在2~2.5cm 左右),然后使用有鉤小鑷提起腹肌,圓頭手術剪剪開腹肌,切口長度約2cm 左右;然后用酒精棉將手術切口周圍和手術者的手指消毒后,將肝臟從腹腔拉出 (注意兩手手指夾住切口的兩側稍向前方推并壓迫腹部),待切除肝臟的肝葉完全暴露于腹腔外;將肝臟推向手術者的左側,暴露出透明的膜狀結締組織并分離,然后將肝臟輕輕向后拉;切斷位于劍突突起的內側與切除的肝葉之間的膜樣結締組織;將結扎用線放置于劍突突起部,用兩手拇指將肝臟輕輕向下方牽引,盡可能使結扎線靠近肝葉的蒂部;用拇指將肝臟翻到上方并將結扎線兩端交叉結扎,用中指將肝臟向上牽引,在盡量靠近肝臟蒂部的地方用力結扎,從而阻斷肝葉的供血;提起待切除肝葉,使用剪刀從蒂部切除,取出切除之肝葉 ; 檢查腹腔及結扎部;常規(guī)縫合肌層與皮層,消毒后包扎;術后7d左右拆線。
7. 卵巢摘除術
在與性腺有關的內分泌研究中,為了排除卵巢的影響,有時會在動物幼齡期進行動物卵巢摘除手術,待手術創(chuàng)面愈合后使用。下面介紹大鼠的卵巢摘除手術步驟。
將大鼠麻醉后固定于固定板上,然后以最后肋骨稍后方為中心剪毛;按照動物皮膚標準消毒脫碘;自腰椎沿背部正中線向下作縱行切口約1~2cm切開皮膚,使用圓頭剪插入皮膚和肌肉之間一邊擴張一邊剝離 (注意摘除左側卵巢時實驗動物取右側臥位,反之亦然),并在皮膚創(chuàng)口上掛上開創(chuàng)器;使用有鉤鑷子夾住從創(chuàng)面看到的肌層,在離脊柱約 1cm處沿肩肝線分別于左右兩肋下剪開長約1cm切口的腰肌,可見位于兩側腎臟外下方呈淡紅色的卵巢及其子宮角。重新掛上開創(chuàng)器 , 暴露脂肪組織,并使用帶環(huán)鑷子輕輕夾住脂肪組織并將其拉出身體 ; 在子宮角上部及下部的卵巢管的部位做兩個結扎,結扎后用環(huán)形鑷切斷子宮角,將卵巢取出;取出卵巢后將脂肪組織還納到腹腔,將腹膜與肌層一起縫合一針后并檢查有無出血,最后間接縫合法縫合皮膚。反之亦然。
卵巢摘除術的結果判定:手術動物經兩周的恢復后,使用動情周期陰道涂片檢查實驗大鼠是否存在動物周期的細胞學特征,應確認無動物周期的出現(xiàn)。
8. 輸精管結扎術
由于實驗研究的需要,有時候需要對實驗動物進行去勢手術。下面介紹大鼠的輸精管結扎手術。
手術步驟:將已經麻醉的大鼠仰臥位固定,使用剪毛剪將后肢兩膝連線上的毛剪凈,常規(guī)消毒脫碘;使用有鉤鑷子夾起皮膚,沿兩膝連線用直剪做長1~1.5cm的切口;然后使用圓頭剪插入皮膚與肌層,邊擴張邊分離;使用有鉤鑷子將肌層夾起,切一長約1.5cm 的切口;自切口處拉出脂肪組織,將一側睪丸拉出體外;使用剪刀和鑷子,分離輸精管, 在倒"U"形處雙縫合線結扎;確認無誤后剪斷;手術完畢將睪丸及其附屬組織回納到腹腔。
同法結扎另一側睪丸輸精管;縫合肌層與皮層。