摘要：DNA原核顯微注射方法制作轉(zhuǎn)基因小鼠時(shí)，轉(zhuǎn)入的目的基因僅僅只是整合在二倍體動(dòng)物的其中一條染色體上，所以是半合子，它的后代只有一部分個(gè)體帶有整合的基因,有的沒有目的基因。所以，轉(zhuǎn)基因小鼠需要一個(gè)相當(dāng)長的篩選和純化過程，以期獲得純合子的轉(zhuǎn)基因小鼠。通常的方法是，制作同一批轉(zhuǎn)基因小鼠后，將其中一的部分與正常的野生型小鼠雜交，檢測后代的整合幾率，再通過同一窩的陽性雌雄小鼠交配，在基因的同源重組作用下，最終得到純合子小鼠。     由于目的基因隨機(jī)整合到基因組，因此首代轉(zhuǎn)基因小鼠將會(huì)有不同的整合位點(diǎn)。整合基因的拷貝數(shù)可能在不同的首代轉(zhuǎn)基因小鼠中也不同。由于這些原因，每一個(gè)首代轉(zhuǎn)基因小鼠需要作為一個(gè)獨(dú)立的譜系對待并且與其它首代轉(zhuǎn)基因小鼠分開來進(jìn)行繁殖。 每個(gè)首代轉(zhuǎn)基因小鼠的子代都需要進(jìn)行轉(zhuǎn)基因遺傳和表達(dá)的檢測。由于不同的整合位點(diǎn)和拷貝數(shù)，每一個(gè)首代轉(zhuǎn)基因小鼠可以有不同的表達(dá)水平。
    一般可采用經(jīng)典育種與PCR 相結(jié)合的方法對轉(zhuǎn)基因小鼠純合子進(jìn)行篩選。將用于建系的原代(F0) 轉(zhuǎn)基因小鼠與野生型小鼠配種繁殖產(chǎn)生的后代(不同窩的仔鼠分別統(tǒng)計(jì)) 為F1。F1中陽性轉(zhuǎn)基因小鼠同胞交配產(chǎn)生的后代為F2。在F2 中選擇數(shù)對陽性鼠同胞交配產(chǎn)生的后代為F3。根據(jù)各窩鼠的整合率及PCR-Southern 的信號(hào)，選出假定純合小鼠。將假定的純合子小鼠與野生型小鼠配種產(chǎn)生F4，根據(jù)后代整合率，對假定的純合子轉(zhuǎn)基因小鼠作出驗(yàn)證。可繼續(xù)傳代以求建立穩(wěn)定的轉(zhuǎn)基因小鼠品系。
    通常情況下，制作轉(zhuǎn)基因小鼠，并經(jīng)過篩選鑒定之后，可以得到純合子的轉(zhuǎn)基因小鼠，而要對某種轉(zhuǎn)基因小鼠保種，則可以直接用純合子來保存育種。
    但是也有例外：如果目的基因有毒性、致畸或胚胎致死性，則有可能無法得到首代轉(zhuǎn)基因小鼠；或者由于純合后基因的毒性增加，導(dǎo)致后代健康狀況差，喪失生育能力或存活期短等問題，此種情況，純合子轉(zhuǎn)基因小鼠不適合用作種系保存，我們會(huì)用半合子小鼠代替，半合子能減輕這種基因效應(yīng)，但也因此而帶來了篩選工作，這樣每次繁殖都需要經(jīng)過煩雜的篩選。